养细胞的小伙伴们都知道,细胞一定要传代,因为细胞在培养过程中不断的繁殖,数量也随之增加,然而培养皿/培养瓶的空间有限,增殖受到抑制,所以必须将一部分细胞移至别的培养皿/培养瓶,让细胞有足够生长空间。
细胞传代也不仅仅是为细胞安一个更大的“家",更重要的,是使细胞系或细胞株进一步增殖,这样,我们才能有足够的细胞做各种各样的实验。
但是,对于传代的时间,很多小伙伴都掌握不好,因为对于不同的细胞来说,判断能否开始传代的标准略有不同,今天,我们就主要来聊一下,细胞传代的时间问题。
什么时候进行细胞传代?
对于贴壁培养和悬浮培养而言,判断是否需要传代主要看以下2个方面:
•细胞密度:
贴壁培养细胞进入对数生长期、未达到汇合状态时即应进行传代,正常细胞达到汇合状态时会停止生长(接触抑制),重新接种后需要较长时间才能恢复,转化细胞即使达到汇合状态也能继续增殖,但是在经过大约两个倍增时间后通常会变质。类似地,
悬浮培养的细胞进入对数生长期、未达到汇合状态时也应进行传代。达到汇合状态时,悬浮培养的细胞会聚集成团块,转动培养瓶时培养基会变得浑浊。
•培养基耗竭:
生长培养基pH值降低通常表示乳酸蓄积,乳酸是细胞代谢的副产物。乳酸有细胞毒性,而且pH值降低也是细胞生长的不利因素。pH值改变的速度通常取决于培养体系中的细胞浓度,细胞浓度越高,培养基耗竭的速度越快。
如果发现pH值迅速降低(>0.1–0.2pH单位),同时细胞浓度增大,则应对细胞进行传代。
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