将动物机体的各种组织从机体中取出,经各种酶(常用胰蛋白酶)、螯合剂(常用EDTA)或机械方法处理,分散成单细胞,置合适的培养基中培养,使细胞得以生存、生长和繁殖,这一过程称原代培养。
原代细胞培养的步骤一般是:取材→分离→培养和维持,今天我们重点介绍原代细胞的取材和分离方法。
一、取材
人和动物细胞的取材是原代细胞培养成功的首要条件,直接影响细胞的体外培养。
取材的基本要求:
①取材要注意新鲜和保鲜
②应严格无菌
③防止机械损伤
④去除无用组织和避免干燥
⑤应注意组织类型、分化程度、年龄等
⑥作好记录
各类组织的取材技术:
①皮肤和粘膜的取材
主要取自于手术过程中的皮片,方法似外科取断层皮片手术操作,但面积一般2~4平方厘米。
②内脏和实体瘤的取材
内脏除消化道外基本是无菌的,但取材时要明确和熟悉所需组织的类型和部位,实体瘤取材时要取肿瘤细胞丰富的区域,要避开破溃、坏死液化部分,以防污染,尽量去除混杂的结缔组织。
③血液细胞的取材
血细胞、淋巴细胞的取材,一般多抽取静脉外周血,或从淋巴组织中(如脾、扁桃体、胸腺、淋巴结等)分离细胞,取材时应注意抗凝。
④骨髓、羊水、胸/腹水细胞取材
严格无菌,注意抗凝,还要尽快分离培养,离心后,用无钙、镁PBS洗两次,再用培养液洗一次后即可培养,不宜低温存放。
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